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Publié sur Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) - 01 Jan 2015

Vidalain PO, Jacob Y, Hagemeijer MC, Jones LM, Neveu G, Roussarie JP, Rottier PJ, Tangy F, de Haan CA

Lien vers Pubmed [PMID] – 25720483

Methods Mol. Biol. 2015;1282:213-29

Over the last 2 decades, yeast two-hybrid became an invaluable technique to decipher protein-protein interaction networks. In the field of virology, it has proven instrumental to identify virus-host interactions that are involved in viral embezzlement of cellular functions and inhibition of immune mechanisms. Here, we present a yeast two-hybrid protocol that has been used in our laboratory since 2006 to search for cellular partners of more than 300 viral proteins. Our aim was to develop a robust and straightforward pipeline, which minimizes false-positive interactions with a decent coverage of target cDNA libraries, and only requires a minimum of equipment. We also discuss reasons that motivated our technical choices and compromises that had to be made. This protocol has been used to screen most non-structural proteins of murine hepatitis virus (MHV), a member of betacoronavirus genus, against a mouse brain cDNA library. Typical results were obtained and are presented in this report.

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25720483